大鼠True insulin定量EIA試劑盒使用說明書

大鼠True insulin定量EIA試劑盒使用說明

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ELISA法。用抗大鼠True insulin單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 True insulin與單抗結(jié)合，加入酶標(biāo)抗體，形成**復(fù)合物連接在板上，加入酶底物TMB，出現(xiàn)藍(lán)色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測(cè)OD值，True insulin濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中True insulin濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為14、8、3.2、1.6、0.8 ng/ml。
3. 標(biāo)本如果需要稀釋可以用蒸餾水稀釋。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測(cè)程序

1. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔6孔，每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul（空白除外）。
2. 加樣：待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品50ul。
3. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液50ul（空白除外）。將反應(yīng)板置37℃120分鐘。(室溫過夜可以提高靈敏度)
4. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
6. 每孔加入100ul終止液混勻。
7. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算。如空白OD低于0.1，也可以直接計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品14、8、3.2、1.6、0.8、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用軟件作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)True insulin含量。軟件可以向本公司郵件索取。

試劑盒性能

            1. 靈敏度：*小的True insulin 檢測(cè)濃度小于0.4ng/ml。

2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠True insulin。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10％。

注意事項(xiàng)

            1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致**度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

            3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

            4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！